本申请要求于2016年7月5日提交的美国临时申请号62/358,337的权益,所述美国临时申请的治疗全部内容在此通过引用并入。
背景
视网膜变性是视网尤其包括利伯氏先天性黑蒙(lca) 、视网膜色素变性(rp)和青光眼的膜变一组病症 。lca是基于可遗传形式的视网膜变性,其特征在于在生命的合物和方前几个月期间严重的视网膜功能障碍和严重的视力损害。lca是法流罕见疾病(影响少于200,000美国人的疾病) ,但lca的用于18种亚型一起是遗传性失明的最常见原因 。指定lca10的治疗亚型是最常见的亚型 ,占所有lca病例的视网>20%。某些形式的膜变lca顺应通过重组腺伴随病毒(aav)的治疗,所述重组腺伴随病毒(aav)经改造为递送缺陷型细胞基因的基于功能性拷贝。在2008年 ,合物和方在i期临床试验中,法流将补充rpe65中的用于突变的转基因通过aav成功地递送至lca2患者(maguiream等人nengljmed.2008;358(21):2240-2248)。注意到一些应答 ,但这些应答不是持久的,因为转基因表达最终丧失(schimmerj等人humgenetherclindev.2015;26(4):208-210;azvolinskya.natbiotechnol.2015;33(7):678-678)。此外 ,引起不同lca亚型的一些基因对于aav递送而言简直太大。因此 ,这些lca亚型仍然无法治愈。
adrp构成所有rp病例的大约30-40% ,并且在adrp患者中,最常见的突变rp相关基因是编码视杆视色素视紫红质的基因(dryja ,t.p.等人thenewenglandjournalofmedicine323,1302-1307(1990);dryja,t.p.等人nature343 ,364-366(1990))。目前 ,不存在fda批准的用于adrp患者的治疗;然而,许多方法正在开发中。这些方法中的大多数是关于“抑制和替代”主题的变化。在这种方法中,敲低负责变性的基因的表达,例如用核酶或经由rna干扰(rnai)敲低视紫红质rna的水平(shrna和sirna方法两者正在探索中) ,然后用“硬化的”基因替代内源等位基因的表达,所述“硬化的”基因不易被核酶或rnai试剂敲低。可能最接近临床的这一主题的变体是由genabletechnologieslimited开发的rhonova试剂。rhonova采用sirna来敲低与aav递送的cdna组合的内源性视紫红质表达(突变体和野生型两者) ,所述cdna编码不易被sirna敲低的经修饰的但功能性视紫红质(http://www.genable.net)。
青光眼,全世界不可逆失明的首因(levkovitch-verbinh等人iovsorg44 ,3388–3393(2003)) ,是视神经病变,其中在视神经头的筛板(laminacribosa)处的视网膜神经节细胞(rgc)轴突的进行性损伤导致轴突变性和细胞死亡(howellgr等人jcellbiol179,1523–1537(2007)) 。目前 ,唯一的治疗 ,无论是通过滴眼液、激光还是切口手术,都是降低眼内压(iop)并且减少在视神经头处的损伤。不幸的是,这在一些患者中是困难的 ,而在其他患者中,尽管侵袭性iop降低,该疾病仍可继续恶化 。该领域长期以来需要替代治疗策略 ,其通过减轻对残余轴突损伤的rgc应答来补充iop降低 。此外,nei已将视神经再生列为其大胆的目标(audaciousgoal),并且任何再生疗法都必须解决视神经切断的rgc存活的问题 。为此 ,非常需要开发可能直接干扰rgc轴突变性和/或轴突损伤相关细胞死亡的活跃遗传程序的神经保护剂(adalbertr等人science(2012),doi:10.1126/science.1223899;yangj等人cell160,161–176(2015);welsbieds等人procnatacadsciusa110,4045–4050(2013);watkinsta等人procnatacadsciusa110 ,4039–4044(2013))。
因此 ,非常需要用于治疗视网膜变性如lca、adrp和青光眼的新型和改进的疗法。
发明概述
除非另有说明,否则本发明的实践通常采用细胞生物学、细胞培养、分子生物学 、转基因生物学、微生物学 、重组核酸(例如dna)技术、免疫学和rna干扰(rnai)的常规技术,所述常规技术在本领域的技术内。这些技术中的某些的非限制性描述在下述出版物中发现 :ausubel,f. ,等人(编辑),currentprotocolsinmolecularbiology、currentprotocolsinimmunology 、currentprotocolsinproteinscience和currentprotocolsincellbiology